Escalamiento de bioprocesos: del cultivo a la purificación de proteínas

Entidad proponente: Laboratorio de Cultivos Celulares - Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas.

Director/res del curso: Dra. Marina Etcheverrigaray - Dr. Gabriel Ignacio Amadeo

Fecha: desde el lunes 2 hasta el viernes 13 de septiembre de 2013

Cierre de inscripción: 19 de agosto de 2013 a través de Cabbio

Requisitos básicos para participar del curso:

El curso está orientado a graduados en Bioquímica, Biotecnología, Farmacia, Ingeniería Química, Licenciatura en Biología o carreras afines. Los candidatos serán seleccionados según sus antecedentes científicos y académicos e intereses de trabajo. Es requisito el conocimiento del idioma inglés.

Para la inscripción, adjuntar el fundamento de la solicitud de inscripción - acompañado del aval del jefe del grupo de trabajo en el que se desempeñe - y currículum vitae completo.

Se efectuará una evaluación final del curso. La evaluación consistirá en:
- Una evaluación escrita sobre los temas tratados en las clases teóricas y seminarios.
- Un informe de los trabajos prácticos realizados detallándose la metodología empleada, resultados y discusión de los mismos.

Para la promoción del curso será necesaria la aprobación de la evaluación escrita y del informe de trabajos prácticos.

Carga horaria: 90 horas (en 2 semanas)

Número de vacantes: 20 alumnos por CABBIO y 1 vacante por FBCB

Lugar: Laboratorio de Cultivos Celulares. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas.

Programa:
CONTENIDOS DE CLASES TEÓRICAS:

Teórico Nº 1: "Introducción al upstream y downstream processing".
Teórico Nº 2: "Expresión de proteínas recombinantes en diferentes sistemas".
Teórico Nº 3: "Sistemas de cultivo de células animales en gran escala: Biorreactores y modos de operación".
Teórico Nº 4: " Fundamentos del escalamiento del cultivo celular en biorreactores ".
Teórico Nº 5: "Ruptura celular y procesamiento de cuerpos de inclusión (refolding)".
Teórico Nº 6: "Separaciones sólido-líquido: procedimientos en diferentes escalas".
Teórico Nº 7: "Métodos cromatográficos de purificación de proteínas".
Teórico Nº 8: "Empleo de membranas de adsorción en la purificación de proteínas".
Teórico Nº 9: "Cromatografía de adsorción en lecho expandido".
Teórico Nº 10: " Introducción a la Tecnología CIM®( Convective Interaction Media). Purificación en columnas monolíticas".
Teórico Nº 11: "Diseño y optimización de procesos de purificación. Parámetros cromatográficos".
Teórico Nº 12: "Escalamiento del downstream processing I: isotermas de adsorción y curvas de breakthrough".
Teórico Nº 13: "Escalamiento del downstream processing II: guías prácticas y restricciones ".
Teórico Nº 14: "Control de calidad de proteínas de uso terapéutico. Determinación de puntos críticos de procesos de producción".
Teórico Nº 15: "Análisis y caracterización del perfil de glicosilación de proteínas recombinantes como nueva herramienta para el control y comparabilidad de productos".
Teórico Nº 16: "Inmunogenicidad de proteínas recombinantes de uso terapéutico: Predicción y validación experimental. Nuevas exigencias regulatorias".
Teórico Nº 17: "Sistemas de gestión de calidad".
Teórico Nº 18: "Aspectos regulatorios y validación de procesos de purificación (Quality by design)".
Teórico Nº 19: "Vigilancia tecnológica e inteligencia competitiva".
CONTENIDOS DE TRABAJOS PRÁCTICOS:
1
A- Producción y purificación de mAb / proteína recombinante
Cultivo de hibridomas productores de mAbs y/o células CHO.K1 productoras de proteína recombinante.
Se trabajará en diferentes escalas de cutivo: frascos tipo spinner de 50 ml y biorreactores de agitación de 5-25 l de volumen de trabajo.
A partir de las respectivas cosechas, se encararán procesos de clarificación mediante centrifugación y filtración, empleando cartuchos o cápsulas apropiadas.
Se realizarán procesos cromatográficos en diferentes escalas:
- Para la escala de laboratorio se empaquetarán resinas de 5-10 ml en columnas XK 16/20 utilizando un cromatógrafo líquido AKTA Purifier.
-Para la escala piloto se empaquetará mayor volumen de resina (mínimo 10 x) en columnas XK 50/20, Amicon 140 o BPG 100/500 trabajando con un cromatógrafo AKTA Pilot.

B- Determinación de la capacidad estática de lisozima en IDA-Sepharose-Cu2+
Este trabajo experimental permitirá obtener dos parámetros: capacidad máxima estática de la resina y constante de afinidad, los cuales poseen un significado real y práctico. El conocimiento de la capacidad máxima permite estimar la cantidad de matriz a emplear en un proceso cromatográfico en el que se pretenda optimizar el tamaño de la columna, y el de la constante de disociación permite estimar la concentración mínima de la proteína de interés que maximice la utilización de la capacidad de la resina.

C- Determinación de la capacidad dinámica de lisozima en IDA-Sepharose-Cu2+
Este trabajo experimental permitirá obtener la capacidad dinámica de la resina, puesto que se estudiará la influencia del flujo de la fase móvil sobre la forma de la curva de breakthrough.

Consultas:
Teléfono/Fax: 54 (0) 342 4552928

E-mail:
marina@fbcb.unl.edu.ar
iamadeo@fbcb.unl.edu.ar

Tipo de curso:

Publicar hasta: 19/07/2013

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